Vitamin A i blodet

Referensvärden (normer) för koncentrationen av vitamin A (retinol) i blodserum: hos barn 1-6 år - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 år - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 år - 0,91-2,51 μmol/l; hos vuxna - 1,05-2,09 μmol/l.

Vitamin A är ett fettlösligt vitamin och finns i två former: vitamin A i sig, eller retinol (finns endast i animaliska produkter), och provitamin A, känt som karoten (erhålls från animaliska och växtbaserade produkter), som kan omvandlas till retinol i matsmältningskanalens väggar. Cirka 50–90 % av retinol från kosten absorberas i tunntarmen och transporteras i ett kylomikronbundet komplex till levern, där det lagras som retinolpalmitat. Vid behov frigörs det i blodomloppet som retinol komplexbundet med vitamin A-bindande protein. I blodserumet binder vitamin A-bindande protein + retinolkomplexet till transtyretin. Från blodserumet tas retinol upp av målceller, såsom fotoreceptorerna i näthinnan och epitelet.

När kroppen får i sig vitamin A i mängder som överstiger behovet (180–430 mcg retinol per dag beroende på ålder, kön och fysiologiskt tillstånd), lagras överskottet i levern och bildar en depå av detta vitamin. När intaget av retinol med mat minskas frigörs dess reserver från levern i blodomloppet, vilket bibehåller koncentrationen av retinol i blodserumet på en normal nivå (över 0,7 μmol/l). Andra biologiskt aktiva former av vitamin A (retinolsyra och retinsyra) finns i blodet i mycket låga koncentrationer (under 0,35 μmol/l); retinolestrar står för cirka 5 % av den totala mängden vitamin A (0,1–0,17 μmol/l).

Vitamin A spelar en viktig roll i oxidations- och reduktionsprocesser. Retinol främjar bildandet av glykogen i levern och musklerna, hjälper till att öka kolesterolhalten i blodet och deltar i syntesen av steroid- och könshormoner. Det är nödvändigt för tillväxt och bildning av skelettsystemet, rodopsin-resyntes och främjar även slemhinnornas och hudens integumentära epitels normala funktion, vilket förhindrar dess metaplasi, hyperkeratos och överdriven avskavning. Vitamin A hjälper till att stärka hår, tänder och tandkött. Under senare år har vitamin A:s mångsidiga roll i att förebygga cancer och reglera immunitet visats (det är nödvändigt för att fullborda fagocytos, ökar Ig-syntesen, stimulerar bildandet av T-mördare, stimulerar typ II-T-hjälpare, etc.). Vitamin A är en aktiv antioxidant som huvudsakligen verkar i närvaro av vitamin E; det skyddar vitamin C från oxidation. Vitamin A-brist anses vara en riskfaktor för maligna tumörer. Experimentella studier har visat att en ökning av halten av vitamin A i kosten ökar medianlivslängden med 17,5 %. Zink är en viktig kofaktor i metabolismen av vitamin A (nödvändig för syntesen av vitamin A-bindande protein).

Det genomsnittliga dagliga behovet av retinol för vuxna (20-50 år) är 1,2 mg (4000 IE, 1 IE motsvarar 0,3 mcg retinol), för gravida kvinnor - 1,5 mg (5000 IE), för ammande kvinnor - 1,8 mg (6000 IE), för personer över 60 år - 2,5 mg (10 000 IE). Minst en tredjedel av det dagliga behovet av retinol bör tillföras kroppen i färdig form; resten kan täckas genom att konsumera karotenoider, från vilka retinol bildas i kroppen. Man bör beakta att cirka 30 % av retinolen i livsmedel förstörs under värmebehandling. Retinols aktivitet är dubbelt så hög som karotenens, dessutom absorberas endast 30-40 % av det senare i tarmen. Därför, när man bedömer kosten, tror man att 1 mg retinol motsvarar ungefär 6 mg karotenoider.

Bestämning av retinol (vitamin A) och karotenoider i blodserum enligt Bessey modifierad av L.A. Anisimova

Metodens princip

Bestämningen av vitamin A och karotenoider baseras på deras hydrolys i en alkalisk alkohollösning följt av extraktion med en blandning av organiska lösningsmedel.

Reagenser

• 11 M kaliumhydroxid (KOH)-lösning.
• 96 % etylalkohol.
• 1 M kaliumhydroxid (KOH)-lösning i 96 % etylalkohol: 1 volym 11 M KOH-lösning blandas med 10 volymer 96 % etylalkohol. Reagenset bereds på studiedagen. Om färgning uppstår under blandningen bör alkoholen renas genom destillation före användning.
• Xylen, kemiskt ren
• Oktan, kemiskt ren
• Xylen-oktan-blandning: framställd genom att blanda lika volymer xylen och oktan.

Studierna utförs med hjälp av en spektrofotometer.

Processen för att bestämma vitamin A

Blod taget från fingret (cirka 1 ml) placeras i ett centrifugrör och placeras i en glaskopp med varmt vatten (temperatur 40-45° C) i 20-30 minuter. För att separera serumet dras blodproppen försiktigt runt kanten av rörväggarna med en tunn glasstav och centrifugeras vid 3000 rpm i 10 minuter.

0,12 ml serum samlas upp och överförs till ett agglutinationsrör, där 0,12 ml 1 M kaliumhydroxidlösning av alkohol tillsätts. Innehållet skakas noggrant.

Provrör med prover placeras i ett vattenbad i 20 minuter vid en temperatur på 60 °C för att utföra hydrolys.

Proverna kyls ner och 0,12 ml xylen-oktanblandning tillsätts. De skakas kraftigt i 10–15 sekunder. De kyls ner igen och centrifugeras.

Det övre lagret som innehåller vitamin A och karotenoider avlägsnas försiktigt med en pasteurpipett med gummikula och överförs till mikrokuvetter.

Proverna spektrofotometras vid en våglängd på 328 nm för att bestämma vitamin A, och vid en våglängd på 460 nm för att bestämma karotenoider.

Efter spektrofotometri exponeras proverna för ultraviolett strålning för att förstöra vitamin A. För detta ändamål installeras en kvartslampa (bakteriedödande lampa) på ett avstånd av 15-20 cm från mikrokuvetterna så att den del av kyvetten som är fylld med vätska exponeras för strålning; bestrålningstiden är 45-60 minuter.

Proverna respektrofotometras vid en våglängd på 328 nm. Vitamin A-halten bestäms av skillnaden i extinktionsvärden (optisk densitet) med hänsyn till koefficienten (faktorn) 637 beräknad av Bessey för vitamin A.

Beräkningen utförs enligt formeln:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Där X är halten av vitamin A, μg/dl; 637 är koefficienten beräknad av Bessey för bestämning av vitamin A; E328(1) är lösningens optiska densitet före bestrålning; E328(2) är lösningens optiska densitet efter bestrålning.

Koefficienten för att omvandla vitamin A-koncentrationen från µg/dL till µmol/L är 0,035.

Halten av karotenoider beräknas med hjälp av formeln:

X = 480–E480,

Där X är karotenoidhalten, μg/dl; 480 är koefficienten beräknad av Bessey för bestämning av karotenoider; E480 är testlösningens optiska densitet.

Notera

Enligt Bessey kan en större eller mindre volym serum användas vid forskning, men dess förhållande till alkohollösningens volym måste vara konstant vid varje förändring av volymen (kvantiteten) av xylen-oktanblandningen.

Normalhalten av vitamin A i blodserum är: hos nyfödda och spädbarn - 160-270 μg/l; hos vuxna - 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). Halten av karotenoider i blodserum hos vuxna är 800-2300 μg/l.